RT - Journal Article T1 - Cloning of BMP-2 Gene and Its Expression Study in E. coli in Order to Produce a Recombinant Drug JF - umsha YR - 2014 JO - umsha VO - 21 IS - 3 UR - http://sjh.umsha.ac.ir/article-1-77-fa.html SP - 196 EP - 202 K1 - Bone Morphogenetic Proteins K1 - Escherichia coli K1 - Proteins Recombinant AB - مقدمه و هدف: پروتئین های مورفوژنتیک استخوانی، گروهی از سایتوکاین های متعلق به ابرخانواده TGFβ می باشند. این پروتئین ها در تکامل بسیاری از ارگان ها و بافت ها، طی دوران جنینی و پس از آن در ترمیم و بازسازی بافت های استخوان و غضروف، نقش دارند. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بررسی بیان این پروتئین در باکتری E.Coli می باشد. روش کار: در این مطالعه تجربی توالی cDNA مربوط به پپتید بالغ پروتئین مورفوژنتیک انسانی2 (BMP-2) در باکتری E.Coli کلون شد. پلاسمید نوترکیب pET28a/BMP-2 پس از توالی  یابی به باکتری بیانی (E.coli BL21(DE3 ترانسفرم گردید. باکتری نوترکیب در محیط LB مایع حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین در دمای C°37 کشت داده شد. القا با IPTG صورت گرفت. بررسی بیان به کمک RT-PCR و SDS-PAGE و تأیید بیان با وسترن بلاتینگ انجام شد. نتایج: توالی ژنی به کمک PCR تکثیر یافت. بعد از آماده سازی ژن و پلاسمید، واکنش اتصال صورت گرفت. توالی یابی، صحت کلونینگ را نشان داد. بررسی بیان با RT-PCR و SDS-PAGE نشان دهنده بیان پروتئین بود. وسترن بلاتینگ نتایج را تأیید کرد. نتیجه نهایی: بیان بالای پروتئین نوترکیب در سیستم پروکاریوتی حاصل شد. استفاده از غلظت های متفاوت القا کننده در ساعت های مختلف نشان داد که 4 ساعت بعد از القا با غلظت 1mM از IPTG ، بیشترین بیان را داریم. LA eng UL http://sjh.umsha.ac.ir/article-1-77-fa.html M3 ER -