fa شناسایی اپی توپهای سلولهای CD4+ T در پروتئین ترشحی MPB51 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در موشهای C57BL/6 سایر تخصص هاي باليني Other Clinical Specialties پژوهشي Original <p dir="rtl" style="text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span style="font-size: 9pt"><strong>مقدمه و هدف:</strong></span> سلولها T کمکی نوع یک (Th1) و لنفوسیتهای CD8+T نقش بسزایی در برقراری حفاظت مقابل عفونت به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس دارند. واکسیناسیون با <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">MPB51</span> موجب بروز پاسخهای سلولی <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">Th1</span> و برقراری حفاظت در مدلهای حیوانی توبرکلوزیس می شود. هدف از این مطالعه شناسایی اپی توپهای غالب لنفوسیتهای <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">T</span> از مولکول <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">MPB51</span> در موشهای <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">C57BL/6</span>   می باشد.</span></p> <p dir="rtl" style="text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong>روش کار :</strong> <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">DNA</span> کدکننده مولکول <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">MPB51</span> ابتدا در پلاسمیدهای <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">pCI</span> کلون گردید. پس از ایجاد گلوله های ژنی حاوی ذرات طلای پوشیده شده از ژن <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">MPB51</span>، با استفاده از تفنگ ژنی <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">(Gene gun)</span> موشهای نژاد <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">C57BL/6</span> واکسیناسیون شدند. دو هفته بعد از آخرین ایمن سازی سلولهای طحالی استخراج شد و در پلیتهای کشت سلولی در حضور یا عدم حضور کتابخانه ای از پپتیدهای هم پوشان سنتتیک حاوی توالی کامل مولکول <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">MPB51</span> در محیط کشت <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">RPMI1640</span> حاوی 10% <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">FCS</span> کشت داده شد. تولید </span><span style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span dir="ltr" style="font-size: 9pt"> </span> داخل سلولی</span><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span dir="ltr" style="font-size: 9pt">IFN-</span></span><span style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span dir="ltr" style="font-size: 9pt">&upsih</span></span><span style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"> و سوپ کشت سلولی به ترتیب با روش فلوسیتومتری و <span dir="ltr" style="font-size: 9pt">ELISA</span> بررسی گردید.</span></p> <p dir="rtl" style="text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong>نتایج :</strong> <span style="font-size:14px">تعیین نقشه اپی توپهای سلول T <span dir="rtl">طحالی با تحریک مجدد با پپتید های ساختگی 20 اسید آمینه ای کل مولکول</span></span><span dir="rtl" style="font-size: 10pt"><span style="font-size:14px"> نشا</span>ن داد که واکسیناسیون</span></span><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span style="font-size: 9pt"> </span><span dir="rtl" style="font-size: 10pt"> </span><span dir="rtl" style="font-size: 10pt">DNA </span></span><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span dir="rtl" style="font-size: 10pt">باعث ایجاد پاسخ ایمنی در برابر پپتید های 190-P171</span></span><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><span dir="rtl" style="font-size: 10pt"> و P191-210 می شود. آنالیزهای بیشتر با استفاده از حذف </span><span dir="rtl" style="font-size: 10pt">دستجات سلولهای T و آنالیز رقت نشان داد آپی توپهای P171 و P191 به ترتیب اپی توپ غالب و نیمه غالب سلول CD₄⁺T محدود به مولکولهای H2-A^b محسوب می شود.</span></span></p> <p dir="rtl" style="text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="color: rgb(45, 135, 179) font-family: tahoma font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px line-height: 15pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong><span dir="rtl" style="font-size: 9pt">نتیجه نهائی:</span><span dir="rtl" style="font-size: 10pt"> </span></strong><span dir="rtl" style="font-size: 10pt"> واکسیناسیون با DNA پلاسمیدی حاوی مولکول MPB51 علاوه بر آنکه موجب ایجاد پاسخهای اختصاصی سلولهای CD₄⁺T می گردد، روش مناسبی برای شناسایی پپتید های ایمونوژن می باشد.</span></span></p> <p style="direction: ltr unicode-bidi: embed text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="color: rgb(45, 135, 179) font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal orphans: auto text-align: -webkit-left text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px -webkit-text-stroke-width: 0px font-family: 'Times New Roman' font-size: 12pt line-height: 17pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong><font size="2">Introduction & Objective:</font></strong><span style="font-size: 12pt"> Both CD4<span style="position: relative top: -4pt">+</span> type 1 helper (Th₁) cells and CD8⁺T cells play effective roles in protection against <em>Mycobacterium tuberculosis</em> infection. DNA vaccine encoding MPB51 can induce Th1-type immune responses and protective immunity upon challenge with M.tuberculosis. This study address to identify T-cell immunodominant epitopes on MPB51 in C57BL/6 mice.</span></span></p> <p style="direction: ltr unicode-bidi: embed text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="color: rgb(45, 135, 179) font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal orphans: auto text-align: -webkit-left text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px -webkit-text-stroke-width: 0px font-family: 'Times New Roman' font-size: 12pt line-height: 17pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong><font size="2">Materials & Methods :</font></strong><span style="font-size: 11pt"> </span><span style="font-size: 12pt">We cloned DNA encoding MPB51 molecule in pCI plasmid. After constructing MPB51 DNA-covered gold cartridge, C57BL/6 mice were immunized by using a gene gun system. Two weeks after the last immunization, the immune spleen cells were cultured in the presence of a synthetic overlapping library peptides covering the mature MPB51 sequence or medium alone. Intracellular and cell culture supernatant gamma interferon (IFN-</span><span style="font-size: 12pt">g</span><span style="font-size: 12pt">) production was analyzed using flow cytometry and ELISA, respectively.</span></span></p> <p style="direction: ltr unicode-bidi: embed text-align: justify"><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="color: rgb(45, 135, 179) font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal orphans: auto text-align: -webkit-left text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px -webkit-text-stroke-width: 0px font-family: 'Times New Roman' font-size: 12pt line-height: 17pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong><font size="2">Results :</font></strong><span style="font-size: 11pt"> </span><span style="font-size: 12pt">Mapping of T-cell epitopes on MPB51 molecule was performed in the spleen lymphocytes restimulated by 20-mer overlapping synthetic peptides of mature MPB51 sequence. Flow cytometric analysis with intracellular IFN-</span><span style="font-size: 12pt">g</span><span style="font-size: 12pt"> and the T-cell phenotype revealed that P171-190 and P191-210 peptides contain immunodominant CD4⁺T-cell epitopes. Further analysis by using T-cell subset depletion and serial peptide dilution revealed that P171 and p191 are H2-A^b-restricted dominant and subdominant CD4⁺ T cell epitopes, respectively.</span></span></p> <p><span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="color: rgb(45, 135, 179) font-style: normal font-variant: normal font-weight: normal letter-spacing: normal orphans: auto text-align: -webkit-left text-indent: 0px text-transform: none white-space: normal widows: 1 word-spacing: 0px -webkit-text-stroke-width: 0px font-family: 'Times New Roman' font-size: 12pt line-height: 17pt background-color: rgb(247, 246, 243)"><strong><span style="font-size: 11pt">Conclusion:</span></strong><span style="font-size: 12pt"> This study proved that vaccination with plasmid DNA encoding M. tuberculosis-secreted MPB51 protein not only induce CD4⁺ T cells immune response but also is an appropriate method for identifying immunogenic peptides.</span></span></p> اپی توپ سلول تی , سل , شناسایی اپی توپ , موش Epitope Mapping , Epitope , T-cell , Mice , Tuberculosis 28 35 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-460&slc_lang=fa&sid=1 Ali Reza Rafiei علیرضا رفیعی rafiei1710@gmail.com 10031947532846001948 10031947532846001948 Yes Yukido Kuade یوکیدو کویاده 10031947532846001949 10031947532846001949 No