Avicenna Journal of Clinical Medicine

fa مقایسه واکنش پروتئین های طبیعی و واسرشته پیکره بروسلا آبورتوس (سویه S19) با آنتی بادیهای سرم بیماران با روش کروماتوگرافی جذبی و وسترن بلات Reaction of Native and Denatured Brucella abortus (S19) Proteins with Antibody Using Affinity Chromatography and Immunoblotting سایر تخصص هاي باليني Other Clinical Specialties پژوهشي Original <p dir="rtl" style="font: 12px/20px tahoma; text-align: justify; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">ایمونوبلات از روشهایی است که بطور معمول برای مطالعه واکنش بین آنتی‌بادی و آنتی‌ژن مورد استفاده قرار می‌گیرد. واسرشته‌شدن برخی از پروتئین‌ها در ایمونوبلاتینگ می‌تواند تأثیر اساسی روی این واکنش بگذارد. در این پژوهش واکنش پروتئین‌های پیکره بروسلا آبورتوس (S19) با سرم جدا شده از گونه‌های انسان و بز مبتلا به بروسلوز و خرگوش ایمن‌شده با بروسلا با روش ایمونوبلاتینگ و کروماتوگرافی‌جذبی مورد بررسی قرار گرفتند. <p dir="rtl" style="font: 12px/20px tahoma; text-align: justify; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">          پس از  کشت انبوه باکتری، استخراج آنتی‌ژن‌های پیکره بروسلا آبورتوس با زویترجنت 14-3 و لیزوزیم انجام گرفت. فراکسیون گاماگلوبولین سرم انسان، بز و خرگوش توسط آمونیوم‌سولفات رسوب داده‌شد. پروتئین‌های پیکره بروسلا آبورتوس از ستونکروماتوگرافی‌جذبی که لیگاند مورد استفاده در آن فراکسیون گاماگلوبولین انسان، بز یا خرگوش بود، عبور داده‌شد.  برای بررسی واکنش پروتئین‌های باکتری با سرم‌ها از دو روش SDS-PAGE و ایمونوبلاتینگ استفاده شد . <p dir="rtl" style="font: 12px/20px tahoma; text-align: justify; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">           SDS-PAGEو ایمونوبلات پروتئین‌های جذب‌شده و جذب‌نشده به ستونهایکروماتوگرافی جذبی حاوی لیگاند گاماگلوبولین انسان،  بز و خرگوش نشان داد کهآنتی‌ژن‌های پیکره بروسلا را از نظر واکنش با آنتی‌بادی می توان به چهار دسته تقسیم کرد: آنتی‌ژن‌هایی که در هر دو حالت طبیعی و واسرشته با آنتی‌بادی واکنش می‌دهند. آنتی‌ژن‌هایی که در حالت طبیعی با آنتی‌بادی واکنش می‌دهند اما در حالت واسرشته واکنشی با آنتی‌بادی نمی‌دهند.  آنتی‌ژن‌هایی که در حالت طبیعی با آنتی‌بادی واکنش نمی‌دهند اما در حالت واسرشته با آنتی‌بادی واکنش می‌دهند. آنتی‌ژن‌هایی که نه در حالت طبیعی و نه در حالت واسرشته با آنتی‌بادی واکنش نمی‌دهند. <p style="font: 12px/20px tahoma; text-align: justify; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">          بطورکلی نتایج نشان داد که بررسی واکنش آنتی‌ژن و آنتی‌بادی با دو روش کروماتوگرافی جذبی و ایمونوبلاتینگ تفاوت‌های قابل ملاحظه‌ای دارند و تفسیر نتایج ایمونوبلاتینگ در خصوص بخشی از پروتئین‌ها چندان قابل اعتماد نیست. <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="font: 12pt/17pt "Times New Roman"; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">Western blotting or immunoblotting commonly use for study of reaction between antigens and antibodies. Denaturation of many proteins in immunoblotting can affect greatly the reactivity of antibodies and outcome of the procedure. <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="font: 12pt/17pt "Times New Roman"; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">In this study proteins of Brucella abortus (S19) was extracted by a mild method and reaction of the extracted proteins with serum of infected human and goat and immunized rabbit compared by affinity chromatography and immunoblotting. Gamma globulin (mostly IgG) fraction of the sera was precipitated by half saturation of ammonium sulfate and linked to activated sepharose 4B. The extracted proteins were loaded on the affinity column. Attached proteins was eluted by low pH and analyzed by SDS-PAGE. Reaction of the total extract and eluted fractions with IgG fraction of sera was evaluated by Western blotting. <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" style="font: 12pt/17pt "Times New Roman"; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">   Upon the results of affinity chromatography and immunoblotting ,  Brucella proteins can be classified in four groups: 1- The proteins that adsorbed to the affinity column and react with IgG in westernblotting. 2- Proteins that react with IgG in native state but no in denatured state. 3- Proteins that do not react with IgG in native state but react in denatured state. 4- Proteins that do not react with IgG in native and denatured state. ایمونوبلات , بروسلا آبورتوس , کروماتوگرافی جذبی Brucella abortus , Chromatography , Affinity , Immunoblotting 14 22 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-517&slc_lang=fa&sid=1 Ramin Karimi رامین کریمی 10031947532846002233 10031947532846002233 No Ali Mostafaie علی مصطفایی 10031947532846002234 10031947532846002234 Yes Bahman Tabaraie بهمن تبرایی 10031947532846002235 10031947532846002235 No Yadollah Bahrami یدالله بهرامی 10031947532846002236 10031947532846002236 No Jalal Abdolalizadeh جلال عبدالعلی زاده 10031947532846002237 10031947532846002237 No