Avicenna Journal of Clinical Medicine

fa مطالعه سه روش خالص سازی HBV DNA جهت استفاده در تکنیک PCR Study the Three Extraction Methods for HBV DNA to Use in PCR سایر تخصص هاي باليني Other Clinical Specialties پژوهشي Original <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="font: 12px/15pt tahoma; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">  تشخیص هپاتیت B با توجه به فراوانی میزان عفونت ناشی از آن از اهمیت ویژه ای برخوردار است. در بین روشهای تشخیصی، اخیرا تکنیک PCR بیش از پیش مورد توجه قرار گرفته است. گزارش های ارائه شده در مراکزی که از این تکنیک استفاده مینمایند حاکی از وجود برخی از موارد منفی کاذب میباشد. هدف از انجام این مطالعه بررسی مقایسه ای بین روشهای خالص سازی رایج میباشد تا ضمن آگاهی از میزان کارایی هر یک بهترین روش شناسایی گردد. <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="font: 12px/15pt tahoma; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">          از 30 نمونه دریافتی از بیماران مراجعه کننده به درمانگاه هپاتیت بیمارستان شریعتی تهران که مبتلا به هپاتیت مزمن بوده و HBs آنتی ژن مثبت و HBe آنتی ژن منفی بودند نمونه سرم تهیه گردید. استخراج HBV DNA با سه روش توسعه یافته جوشاندن بعنوان یک روش سریع، روش فنل کلروفرم بعنوان یک روش دقیق، و روش خالص سازی مبتنی بر گوانیدیوم هیدروکلراید انجام گردید. کیتPCR برای تشخیص هپاتیت از شرکت سیناژن استفاده گردید که شامل آنزیم taq پلیمراز و مخلوط واکنشی متشکل از پرایمر dNTP و بافر واکنش بود. پروتکل PCR مزبور قادر به تکثیر محصولی به طول bp 353 بود. سپس با چرخه گرمایی مناسب نمونه ها با واکنش PCR تکثیر گردید و محصول PCR در سه روش مقایسه شد. <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="font: 12px/15pt tahoma; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">          نتایج بدست آمده در مرحله اول موید موفقیت پروتکل استفاده شده در تشخیص DNA هپاتیت B در سرم بود. همچنین میزان موارد مثبت روش جوشاندن ، روش فنل کلروفرم و کیت خالص سازی به ترتیب 19،16 و 23 و موارد منفی به ترتیب 14، 11 و 7 مورد بود. <span id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList1_ctl00_abstractLabel" style="font: 12px/15pt tahoma; color: rgb(45, 135, 179); text-transform: none; text-indent: 0px; letter-spacing: normal; word-spacing: 0px; white-space: normal; widows: 1; font-size-adjust: none; font-stretch: normal; background-color: rgb(247, 246, 243); -webkit-text-stroke-width: 0px;">          روش PCR  سریعترین و دقیق ترتین روش جهت شناسایی بیماران بوده و روش تخلیص DNA  توسط گوانیدیوم هیدروکلراید در ویروس ها موفقیت آمیز ترین روش بکار رفته در این بررسی است. <span -webkit-text-stroke-width:="" background-color:="" color:="" font-size-adjust:="" font-stretch:="" id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" letter-spacing:="" new="" style="font: 12pt/17pt " text-indent:="" text-transform:="" times="" white-space:="" widows:="" word-spacing:="">Diagnosis of Hepatitis B is important because of the its high prevalence. Recently PCR method , has found greater interest among different diagnostic methods. Several reports emphasis on some false negative results in those laboratories using PCR. The aim of this study was to compare three different procedures for HBV DNA extraction. <span -webkit-text-stroke-width:="" background-color:="" color:="" font-size-adjust:="" font-stretch:="" id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" letter-spacing:="" new="" style="font: 12pt/17pt " text-indent:="" text-transform:="" times="" white-space:="" widows:="" word-spacing:="">            A total 30 serum samples received from Shariati hospital. Sera was taken from patients having chronic Hepatitis with HBs antigen positive and HBe antigen negative. The sensitivity of guanidium hydrochloride method for extracting the HBV DNA from serum were evaluated and compared with phenol–chloroform and boiling methods. Diagnostic PCR kit was obtained from Cynagene contained taq polymerase, reaction mixture, dNTP, and buffer for reaction. A 353 bp product were amplified by    amplification program provided in used PCR protocol. <span -webkit-text-stroke-width:="" background-color:="" color:="" font-size-adjust:="" font-stretch:="" id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" letter-spacing:="" new="" style="font: 12pt/17pt " text-indent:="" text-transform:="" times="" white-space:="" widows:="" word-spacing:="">            The comparison of results indicated that procedure was successful for amplification of the designed products from Hepatitis B in sera. Number of positive results were 16,19,23 and number of negative result were 14,11,7 for the boiling, phenol-chloroform and guanidium-hydrochloride extraction methods respectively. <span -webkit-text-stroke-width:="" background-color:="" color:="" font-size-adjust:="" font-stretch:="" id="ctl00_ContentPlaceHolder1_DataList2_ctl00_abstractLabel0" letter-spacing:="" new="" style="font: 12pt/17pt " text-indent:="" text-transform:="" times="" white-space:="" widows:="" word-spacing:="">            PCR method is the fastest diagnosis method and the most accurate procedure to identify Hepatitis B. Guanidium hydrochloride method was the most successful procedure studied in this survey for viruses. اسید نوکلئیک , واکنش زنجیره پلیمراز , هپاتیت B Hepatitis B , Nucleic Acid , Polymerase Chain Reaction 10 14 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-11-2-539&slc_lang=fa&sid=1 Nasrin Sheikh نسرین شیخ 100319475328460013843 100319475328460013843 Yes Masoud Hajia مسعود حاجیا 100319475328460013844 100319475328460013844 No Ashraf Mohammadkhani اشرف محمدخانی 100319475328460013845 100319475328460013845 No مسعود کورکی 100319475328460013846 100319475328460013846 No