fa بررسی اثرات درمانی حذف lncRNA NEAT1 و القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان پروستات با استفاده از CRISPR/Cas9 پزشكي ملکولی و بیوتکنولوژی Molecular Medicine & Biotechnology پژوهشي Original <p><span style="font-family:Tahoma;"><strong><span style="position:relative;top:-1.0pt;"><span style="color:#274cc3;"><span style="font-size:10.0pt;">سابقه و هدف:</span></span></span></strong>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">lncRNA</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">Long non-coding ribonucleic acid</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;">) به عنوان کنترل‌کننده اساسی ژن‌ها و مارکرهای پیش‌آگهی در سرطان‌های مختلف شناسایی شده‌ است. در این مطالعه، اثر تخریب </span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">NEAT1</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">lncRNA</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">Nuclear</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">Paraspeckle</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">Assembly</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">Transcript</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">1</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;">) با استفاده از سیستم </span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">CRISPR/Cas9</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">Clustered</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">regularly</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">interspaced</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">short</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">palindromic</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">repeats/</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">CRISPR associated protein 9</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;">) در رده سلولی </span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">PC-3</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;"> مورد بررسی قرار گرفت</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span></p> <p dir="RTL" style="text-align: justify; direction: rtl; unicode-bidi: embed;"><span style="font-family:Tahoma;"><strong><span style="position:relative;top:-1.0pt;"><span style="color:#274cc3;">مواد و روش‌‌ها:</span></span></strong>&nbsp;در این مطالعه تجربی، پلاسمیدهای نوترکیب حامل <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">sgRNA</span></span> (<span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Single</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">guide</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">RNA</span></span>) در سیستم <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">CRISPR</span></span> طراحی و ساخته شدند. سلول‌های رده سرطان پروستات <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PC-3</span></span> با وکتورهای نوترکیب، ترانسفکت شده و میزان بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوز با استفاده از روش <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">q-PCR</span></span> (<span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Quantitative</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">polymerase</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">chain</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">reaction</span></span>) سنجیده شد. از آزمون‌های انکسین، <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">MTT</span></span> و خراش سلولی به ترتیب برای بررسی فعالیت‌های آپوپتوزی، زیستایی و تکثیر سلولی و مهاجرت سلولی استفاده گردید.</span><span style="font-family:B Nazanin;"></span></p> <p dir="RTL" style="text-align: justify; direction: rtl; unicode-bidi: embed;"></p><p></p> <p dir="RTL" style="text-align: justify; direction: rtl; unicode-bidi: embed;"><span style="font-family:Tahoma;"><strong><span style="position:relative;top:-1.0pt;"><span style="color:#274cc3;">یافته‌ها:</span></span></strong>&nbsp;تخریب ژن <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">NEAT1</span></span> با روش <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">CRISPR/Cas9</span></span> سبب تغییرات محسوس در بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوز گردید؛ به طوری که بیان ژن‌های <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P21</span></span>، <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">BCL2</span></span> و <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">BIRC5</span></span> کاهش یافت و بیان <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P53</span></span> و <span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">BAX</span></span> افزایش پیدا کرد. علاوه‌براین در سلول‌های گروه تیمار، میزان تکثیر و مهاجرت سلولی نسبت به گروه کنترل کاسته شد. افزایش آپوپتوز در سلول‌های ویرایش ژن شده نسبت به گروه کنترل مشاهده گردید.<span style="font-family:B Nazanin;"></span></span></p> <p><span style="font-family:Tahoma;"><strong><span style="position:relative;top:-1.0pt;"><span style="color:#274cc3;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></span></strong>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:9.0pt;">NEAT1</span></span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;"> به عنوان یک انکوژن، نقش مهمی در تومورزایی دارد و تخریب آن سبب کاهش بقا و مهاجرت سلولی و نیز افزایش آپوپتوز سلول‌های سرطانی می‌شود.</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span><br> &nbsp;</span></p> <strong>Background and Objective:</strong> Long non-coding ribonucleic acid (lncRNA) has been identified as an important gene regulator and prognostic marker in various cancers. The present study aimed to investigate the effects of Nuclear Paraspeckle Assembly Transcript1 (NEAT1) gene knockout using Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-associated Protein 9 (CRISPR/Cas9) in PC-3 cell line.<br> <strong>Materials and Methods:</strong> In this experimental study, recombinant plasmids carrying single guide RNA in the CRISPR system were designed and constructed. The prostate cancer PC3 cell lines were transfected by recombinant vectors, and apoptotic gene expression was evaluated using the quantitative polymerase chain reaction technique. Furthermore, annexin, MTT, and wound healing assays were applied for apoptosis, cell proliferation, and cell migration activities respectively.&nbsp;<br> <strong>Results:</strong> Knockout of NEAT1 gene using CRISPR/Cas9 technique caused significant changes in the expression of apoptosis-related genes in a way that the expression of P21, BCL2, and BIRC5 genes decreased, while the expression of P53 and BAX increased. In addition, in the treatment group, the rate of cell proliferation and migration was reduced compared to those in the control group. Moreover, an increase was observed in the apoptosis rate in genetically modified cells compared to the control group.<br> <strong>Conclusion:</strong> As an oncogene, NEAT1 plays an important role in tumorigenesis and its knockout reduces cell survival and migration and increases the apoptosis of cancer cells.<br> &nbsp; ژن NEAT1, سرطان پروستات, سلول‌های PC-3, کریسپر Cas9 CRISPR-Associated Protein 9, NEAT1 Long Non-coding RNA, Prostatic Neoplasms, PC-3 Cells 49 58 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-11-1851-2&slc_lang=fa&sid=1 Nastaran Haghighi نسترن حقیقی 100319475328460014843 100319475328460014843 No PhD Student in Molecular Genetics, Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran Abbas Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 100319475328460014844 100319475328460014844 Yes Associate Professor, Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran Jafar Kiani جعفر کیانی 100319475328460014845 100319475328460014845 No Assistant Professor, Department of Molecular Medicine, Faculty of Advanced Technologies in Medicine, Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran