fa جداسازی و کشت اولیه هپاتوسیت های کبد رت با استفاده از آنزیم اکتینیدین میوه کیوی سایر تخصص هاي باليني Other Clinical Specialties پژوهشي Original <p align="justify"> <strong>مقدمه و هدف</strong>: برای تجزیه ماتریکس خارج سلولی، جداسازی و کشت اولیه سلول ها، از آنزیم های پروتئولیتیک، بخصوص کلاژناز برای هضم بافت استفاده می شود. یافتن پروتئاز جایگزین کلاژنازهای باکتریایی یا جانوری در منابع گیاهی که راحتر و کم هزینه تر تخلیص گردد، از اهمیت ویژه ای برخوردار است. در مطالعه حاضر از آنزیم اکتینیدین که به وفور در میوه کیوی یافت می شود، برای جداسازی و کشت هپاتوسیت های کبد موش صحرایی استفاده شد.</p><p align="justify"> <strong>روش کار</strong>: در این مطالعه تجربی آنزیم اکتینیدین پس از تخلیص، در غلظتهای مختلف با روش پرفیوژن یک و دومرحله ای برای جداسازی هپاتوسیت ها از کبد موش صحرایی بکار برده شد. هپاتوسیت های جدا شده در پلیت های کلاژن دار در محیط کشت ویلیامز- ای کشت داده شدند. درصد زنده بودن سلول های جداشده با استفاده از آزمون تریپان بلو و مورفولوژی سلول ها در مراحل کشت پس از رنگ آمیزی با روش پاپانیکولا بررسی شد. </p><p align="justify"> <strong>نتایج</strong>: اکتینیدین با غلظت 0.4 میلی گرم در میلی لیتر در روش پرفیوژن دومرحله ای توانست بطور مناسب هپاتوسیت ها را از کبد موش جدا نماید. درصد سلول های جدا شده 95-90 درصد تخمین زده شد. سلول ها پس از کشت درپلیت های حاوی کلاژن مرفولوژی هپاتوسیت را به وضوح نشان دادند. </p><p align="justify"> <strong>نتیجه نهایی</strong>: این نتایج نشان داد که اکتینیدین پروتئاز مناسبی برای جداسازی هپاتوسیت ها از کبد است. بعلاوه، تخلیص اکتینیدین در مقایسه با کلاژنازها ساده تر و کم هزینه تر است. </p> <p align="justify"> <strong>Introduction & Objective</strong>: Isolation of cells from different tissues rely on proteolytic enzymes mainly collagenases that selectively digest collagen fibers of extra-cellular matrix. It is important to find new and proper collagenases from plant sources. In the present research actinidin, a cysteine protease abundant in Kiwifruit, was used to isolate and culture of rat hepatocytes. </p><p align="justify"> <strong>Materials & Methods</strong>: Different concentrations of actinidin was used to isolate rat hepatocytes by one or two-step perfusion method. The viability of the separated cells was examined by the trypan blue test. The isolated rat hepatocytes were cultured on collagen coated plates in William´s E medium. The morphology of hepatocytes was examined microscopically after staining with the Papanicolaou method. </p><p align="justify"> <strong>Results</strong>: Actinidin in the concentration of 0.4 mg/ml in two-step perfusion method properly isolated hepatocytes from rat liver. The viability of isolated hepatocytes that successfully cultured in collagen coated plates was 90-95 percent. </p><p align="justify"> <strong>Conclusion</strong>: These results showed that actinidin is a proper protease for isolation of hepatocytes. In addition, purification of this enzyme is simpler than the collagenases. </p> اکتینیدین , کلاژناز , هپاتوسیت Actinidin , Collagenase , Hepatocyte 16 22 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-383&slc_lang=fa&sid=1 Zeynab Shirvani Farsani زینب شیروانی فارسانی 10031947532846001642 10031947532846001642 No Kamran Mansouri کامران منصوری 10031947532846001643 10031947532846001643 No Ali Bidmeshkipour علی بیدمشکی پور 10031947532846001644 10031947532846001644 No Ali Mostafaie علی مصطفایی 10031947532846001645 10031947532846001645 Yes