Avicenna Journal of Clinical Medicine

fa تخلیص بتالاکتوگلوبولین از شیر گاو و مطالعه آنتی ژنیسیته آن Simple Methods for Purification of Beta-Lactoglobulin from Cow’s Milk while Preserving Its Antigenicity سایر تخصص هاي باليني Other Clinical Specialties پژوهشي Original           بتا لاکتوگلوبولین (BLG) یکی از پروتئین های اصلی لاکتوسرم در شیر نشخوارکنندگان به ویژه گاو و غیر نشخوارکنندگان مانند اسب می باشد .  این پروتئین نسبتا" در برابر دما و تغییرات p H مقاوم است و شواهدی حاکی از جذب  BLGبصورت دست نخورده در روده انسان هستند . تراوایی روده در دوران شیرخوارگی بیشتر است . لذا در نوزادان شیر خوار که با شیرگاو یا شیر خشک هایی که از شیر گاو تهیه شده اند تغذیه می شوند , جذب یک پروتئین بیگانه به صورت دست نخورده به داخل خون ممکن است سبب تحریک واکنشهای ایمنی و بعضاً بروز عوارضی به صورت زودرس ( آلرژی غذایی ) یا دیررس در کودک گردد . در غالب مطالعات انجام شده , B L G به همراه کازئین بعنوان آلرژن اصلی شیر گاو معرفی شده است . نظر به اهمیت این پروتئین , تخلیص آن برای مطالعات ایمونولوژیک و سرولوژیک و نیز راه اندازی روشهای آزمایشگاهی (مانند E L I S A و RAST ) برای کاوشهای دقیق تر تشخیصی ضرورت می یابد . BLG بعنوان یک مارکر با وزن مولکولی نسبتاً پائین KDa) 18~) برای برخی آزمونهای آزمایشگاهی نیز کاربرد دارد. هدف از انجام این مطالعه معرفی روشی ساده و نسبتا" کم هزینه برای تخلیص BLG با حفظ ویژگیهای آنتی ژنیک آن می باشد.           با جداسازی کازئین از شیر چربی گرفته شده با استفاده از اسید کلریدریک , لاکتوسرم بدست آمد . گلوبولین های لاکتوسرم با استفاده از سولفات آمونیوم نیم اشباع رسوب داده شد . نمونه حاصله به دو روش ژل فیلتراسیون و کروماتوگرافی تعویض آنیونی با دی اتیل آمینو اتیل سلولز DEAE-C تخلیص گردید. خلوص نمونه با روشهای الکتروفورز و HPLC و آنتی ژنیسیته آن با روشهای ELISA , وسترن بلاتینگ و مهار E LISA تائید گردید .           بتالاکتوگلوبولین در ژل فیلتراسیون با اوج دوم و در کروماتوگرافی تعویض آنیونی گلوبولین های رسوب داده شده با سولفات آمونیوم و نیز لاکتوسرم با اوج دوم از ستون خارج شد.               نتایج حاصله حاکی از خلوص بالا و حفظ آنتی ژنیسیته نمونه تخلیص شده بودند. <div>           Beta-lactoglobulin (BLG) is a major whey protein in the milk of ruminants,    e.g. cows, and such non-ruminants as horses. This protein is resistant under    various conditions of pH and temperature. There is some evidence of    absorption of some intact BLG in humans. Infants being fed with cow’s milk-    based formulas are especially prone to develop adverse reactions against    proteins, including BLG, absorbed intact through their intestinal wall that is    more permeable than that of adults. Regarding its importance, purification    of BLG for immunological and serological studies and for setting up such    diagnostic tests as ELISA  and RAST is undoubtedly necessary. The aim of this    study was to introduce a simple, reproducible, fast and less expensive    method for BLG purification while saving its antigenicity, as well.           Whey (lactoserum) was prepared by isolating casein from defatted milk    using HCl. Globulins were then precipitated in whey by half-saturated    ammonium sulfate. The whey and precipitated globulins were used for    Sephadex G-50 gel filtration and diethyl aminoethyl cellulose anion    exchange chromatography. Using enzyme-linked immunosorbent assay    (ELISA), Western blotting and ELISA inhibition assay, antigenicity of the    purified protein was then evaluated.           In gel filtration, BLG was eluted with the second peak. In anion    exchange chromatography of ammonium sulfate precipitated proteins and    of whey proteins, it was eluted with the second peak.           Our results showed high purity and well-preserved antigenicity of BLG    thus purified. </div> آنتی ژنیسیته / بتا لاکتوگلوبولین / پروتئین های شیر گاو / تخلیص پروتئین Antigenicity / Beta-Lactoglobulin / Cow’s Milk Protein / Protein purification 0 0 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-11-185-10&slc_lang=fa&sid=1 Tirang Neyestani تیرنگ نیستانی 10031947532846003217 10031947532846003217 Yes محمود جلالی 10031947532846003218 10031947532846003218 No محمد پزشکی 10031947532846003219 10031947532846003219 No سیدعلی کشاورز 10031947532846003220 10031947532846003220 No فریدون سیاسی 10031947532846003221 10031947532846003221 No محمدرضا اشراقیان 10031947532846003222 10031947532846003222 No اسدالله رجب 10031947532846003223 10031947532846003223 No