fa تعیین الگوی آنتی ژنی هلیکوباکتر پیلوری جداشده از بیماران مبتلا به اولسر پپتیک به روش ایمنوبلاتینگ سایر تخصص هاي باليني Other Clinical Specialties پژوهشي Original <p dir="RTL" style="text-align: justify;">&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp;هلیکوباکتر پیلوری&nbsp; از عوامل اتیولوژیک مهم در ایجاد عفونت مزمن مخاط معده, گاستریک مزمن, زخمهای پپتیک و سرطان معده در انسان است. هدف از این تحقیق تعیین مشخصات ، خصوصیات آنتی ژنی و آنتی ژن غالب در آن می باشد که می تواند در بررسی پاسخ سیستم ایمنی نسبت به آن و تهیه واکسن موثر علیه آن راهگشا باشد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; ابتدا بیوپسی معده بیماران مبتلا به اولسرپپتیک توسط پزشک متخصص تهیه و در شرایط استریل هموژنیزه شد بعد روی محیط کشت اختصاصی در شرایط میکروآئروفیلیک کشت گردید.&nbsp; سپس از کلنی های خالص محیط کشت 25 مورد هلیکوباکترپیلوری برداشت شد و&nbsp; با استفاده از عمل سونیکاسیون (<span dir="LTR">sonication</span>) به حالت سوسپانسیون درآمد. با استفاده از سوسپانسیون، الگوی آنتی ژنی این میکروارگانیسم به روش <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> تعیین گردید. سپس با انجام دات بلات و وسترن بلات بوسیله سرم همان بیماران, آنتی ژنهای غالب شناسائی شدند.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; در بررسی الگوی آنتی ژنی ناشی&nbsp; از <span dir="LTR">SDS-PAGE</span>،&nbsp; عمده باندهای بدست آمده در ناحیه 97-55 کیلودالتون و برخی دیگر در ناحیه 24 کیلودالتون بودند. نتایج تست دات بلات بیماران نیز مثبت شدند. بعد از آزمایش دات،&nbsp; در آزمایشات وسترن بلات, تنها آنتی ژن پاسخگر در محدوده 97-55 کیلودالتون با آنتی سرم بیماران واکنش داد. در بررسی های کمی, هنگامیکه از سرم تغلیظ شده, توسط سولفات آمونیوم اشباع استفاده می گردید, نتایج وسترن بلات بهتر قابل ارزیابی بود.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; بررسی وسترن بلات در این بیماران نشان میدهد آنتی ژن 97 کیلو دالتون در&nbsp; باکتری قدرت تحریک سیستم ایمنی&nbsp; را داشته ( <span dir="LTR">&nbsp;Immunodominant</span>) و در این بیماران علیه آن آنتی بادی تولید می شود ، لذا جهت تولید واکسن بایستی مد نظر قرار گیرد.</p> <p style="text-align: justify;">Helicobacter pylori is an important etiologic cause of chronic infection<br> &nbsp;&nbsp; of gastric mucus, chronic gastritis, peptic ulcers and gastric cancer in<br> &nbsp;&nbsp; human. The aim of this study was to identify and characterize the dominant<br> &nbsp;&nbsp; antigen of H.pylori, which is responsible for the humoral and cellular immune<br> &nbsp;&nbsp; responses.</p> <p style="text-align: justify;">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; Gastric biopsy of patients with gastric ulcers were sent to microbiology<br> &nbsp;&nbsp; lab. First, samples were homogenized at sterile conditions, and then they<br> &nbsp;&nbsp; were cultured in special medium and micro-aerophylic conditions.<br> &nbsp;&nbsp; 25 colonies of H.pylori were removed from culture medium and the whole-<br> &nbsp;&nbsp; cell lysates were analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel<br> &nbsp;&nbsp; electrophoresis. Immunoblots were performed using sera from H.pylori-<br> &nbsp;&nbsp; infected persons . Specific H.pylori antibody responses in persons were<br> &nbsp;&nbsp; analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay.</p> <p style="text-align: justify;">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; Two groups of bands appeared after staining of the SDS-PAGE with<br> &nbsp;&nbsp; comassie blue. One group was within 55-97KD and the other were around<br> &nbsp;&nbsp; 20-24 KD. Western - blotting analysis detected a band around 55-97 KD,<br> &nbsp;&nbsp; which is dominant antigen and responsible for immune response against<br> &nbsp;&nbsp; H.pylori. Using ammonium sulfate as a precipitant for sera would have<br> &nbsp;&nbsp; valuable effects in the westernblot results.</p> <p style="text-align: justify;">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; As it is shown in the results , an antigen with MW=97 KD is immunodominant<br> &nbsp;&nbsp; and stimulate patient&rsquo;s immune system to produce antibody and can be<br> &nbsp;&nbsp; candidate as a subunit vaccine in future.</p> ایمنوبلاتینگ , زخم پپتیک , نمونه برداری بافتی , هلیکوباکتر پیلوری Biopsy / Helicobacter pylori / Immunoblotting / Peptic Ulcer 0 0 http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-11-185-33&slc_lang=fa&sid=1 Jalil Tavakkol Afshari جلیل توکل افشاری 10031947532846003057 10031947532846003057 Yes Mehrangiz Khajehkaramedini مهرانگیز خواجه کرم الدینی 10031947532846003058 10031947532846003058 No Mozhgan Khayyat Moghaddam مژگان خیاط مقدم 10031947532846003059 10031947532846003059 No Naser Mahdavi Shahri ناصر مهدوی شهری 10031947532846003060 10031947532846003060 No Ali Reza Zamani علیرضا زمانی 10031947532846003061 10031947532846003061 No Amir Reza Boroumand امیررضا برومند 10031947532846003062 10031947532846003062 No